剂 2019-09-06颁布 2019-09-09践诺 青岛诺安百特生物工夫有限公司 颁布 前 言 为了却构企业临蓐Q/NABT 青岛诺安百特生物工夫有限公司企业规范 Q/NABT 007-2019 畜禽养殖境况葡萄球菌噬菌体改革，的规范化收拾推动企业产物，行业临蓐效劳更好地为畜牧， 点及本质情景遵循产物的特，本规范特同意。则第 1一面：规范的构造和编写》给出的条例举办 编造本规范遵循 GB/T 1.1-2009《规范化事情导。 为类型性附录本规范附录 A。生物工夫有限公司提出本规范由青岛诺安百特。安百特生物工夫有限公司本规范草拟单元：青岛诺。芝、潘强、任慧英、闫艳新本规范苛重草拟人：孙虎。年 9 月初度颁布本规范于2019。改革剂的请求、类型性援用文献、试验要领、检修条例、 标签、包装、运输、储存和保质期畜禽养殖境况葡萄球菌噬菌体改革剂 1 界限 本规范原则了畜禽养殖境况葡萄球菌噬菌体。A1为苛重原料的境况改革剂产物本规范合用于以葡萄球菌噬菌体S，葡萄球菌的 改革用于畜禽养殖境况。关于本文献的操纵是必不行少的2 类型性援用文献 下列文献。期的援用文献平常阐明日，合用于本文 件仅注日期的版本。期的援用文献平常不注日，的批改单）合用于本文献其最新版本（包罗一齐。10食物安世界家规范食物微生物学检修菌落总数测定 3 请求 3.1 噬菌体 应切合国度闭连安然原则的请求GB/T 191包装储运图示记号 GB/T 9724化学试剂 pH 值的测定 GB 4789.2-20。后正在双层平板上培植12-14h3.2 噬菌斑检测 本产物稀释，mm把握中央透后的噬菌斑葡萄球菌噬菌体变成0.5。为无异味、透亮的淡黄色液体3.3 感官目标 本产物。理化目标应切合表 1请求3.4 理化目标 产物。 目标 7 噬菌体效价表 1 理化目标 项目， 值界限 6.0～8.0 2 杂菌PFU/mL ≥1.0×10 pH，要领 4.1 噬菌斑的测定 按附录 A 中A.6 的原则测定CFU/mL ＜1.0×10 裂解成果 ≥90% 4 试验。测 样品装正在幼烧杯内4.2 感官目标检，用目测法举办检测正在明亮光辉下采。 界限 按GB/T 9724 的原则举办4.3 理化目标检测 4.3.1 pH。录A 中A.6 的双层平板法测定4.3.2 噬菌体效价检测 按附。按GB4789.2原则举办4.3.3 杂菌数检测 。 中A.7 的裂解成果测定要领测定4.3.4 裂解成果检测 按附录A。统一配方、统一工艺临蓐的一个型号的产物为一个批5 检修条例 5.1 组批 统一批次的菌种、。按包装件数的1％随机抽取5.2 抽样 每批产物，少于5件样品数不。每批产物应留样5.3 留样 ，样记载填写留，于保质期后的2个月样品生存年华不少。检修分出厂检修和型式检修5.4 检修分类 产物。须逐批根据本规范的原则举办检修5.5 出厂检修 出厂检修必。斑、噬菌体效价、 杂菌数、裂解率检修项目为：表观、pH 值、噬菌，部分检修及格经公司质检，及格证后并签发，出厂方可。6.1 下列情景之暂时5.6 型式检修 5.，a) 新产物定型时应举办型式检修： ；产工艺有较大厘革b) 原资料或生，产物功能时恐怕影响；机构举办产物格料查验时c) 国度质料工夫监视；质料不不变时d) 产物；次型式检修有较大区别时e) 出厂检修结果与上；产半年以上f) 停，临蓐时光复。本规范“请求” 中的齐备项目5.6.2 型式检修项目为。有一项目标不切合本规范请求时5.7 鉴定条例 检修结果中，品中加倍抽样可正在同批产，目举办复检对不足格项，批产物举办鉴定以复检结果对该。切合本规范请求时如复检结果仍不，鉴定为不足格则该批产物。191 的原则 6.2 产物标签应包罗下列实质： a）产物名称、产物规范编号6 记号、包装、运输、积蓄和保质期 6.1 包装储运图示记号应切合 GB/T；、地方、相干格式b）临蓐厂名称；阐发、m88在线入口。当心事项c）产人品使；日期、批号d）临蓐；品保质期e）产；条目和要领f）储存。用明净的塑料瓶、桶包装6.3 包装 本品采，密无揭发封口应苛，闭连规范、无毒 的包装资料所采用的包装物应切合国度。输器材应干净卫生6.4 运输 运，免日晒雨淋运输中应避，℃以上高温避免35，时幼心轻放搬运装卸，倒 置不得，整、记号清爽维持包装完，物质混装混运不得与有毒。阴凉、透风、干燥的货仓中6.5 储存 产物储存正在，4℃~25℃蕴藏温度 ，暴晒和雨淋避免日光，物品及消毒剂一同混贮不得和有毒、 无益。切合本规范请求时6.6 有用期 ，经启封产物未，质期为12个月自临蓐之日起保。要领 A.1 实习筑造 A.1.1 实习仪器 a ）恒温培植箱附录A （类型性附录） 噬菌斑、噬菌体效价、噬菌体裂解率测定；冻离心术b ）冷；温饱风干燥箱c ）电热恒；超净事情台d ）生物；蒸汽灭菌锅e ）高压；温水浴锅f ）恒；电子天平g ）。药品 a ）卵白胨A.1.2 实习；牛肉浸粉b ）；氯化钠c ）；琼脂粉d ）；氢氧化钠e ）。萄球菌 ATCC29213 A.1.3 宿主菌 金黄色葡。拥有磨塞口的无色透后试剂瓶动作样品瓶A.2 取样 以无菌的200mL ， 30mL 置于样品瓶中匀称混和用无菌移液管从 5 瓶产物中各取，塞盖苛用磨，口膜封口并用封，明产物名称贴上标签注，号批，日期临蓐，样日期取 。置于另一无菌的 200mL 样品瓶中按与上述相像的要领取样 150mL ，上）密 封后留存阐明标签（实质同。上述同化匀称的样品(切确到 0.01 mL) A.3 样品造备 从样品瓶中取 10 mL ，SM 缓冲液（NaCl 参预带盛有 90 mL ，8g5.；·7H OMgSO ，g 2；·Cl Tris，l/L1mo，7.5 pH ，mL50； 明胶2%，mL5；1000mL蒸馏水补足 ，措置）的三角瓶中灭 4 2 菌，min 敷裕振荡 5 min正在转动式摇床上 200 r/，噬菌体悬液即成母液的。头取 1mL 上述噬菌体悬液A.4 样品稀释 用无菌枪，SM 缓冲液的试管中参预盛有 9mL ，参预另一盛有 9mL SM 缓冲液的离心管中敷裕混匀后从中取 1mL 稀释后的噬菌体悬液，述操作反复上，8 10 -10 8 个梯度将样品的浓度稀释成 -2 -。粉 3 g/L 氯化钠 5 g/L 琼脂 15 g/L pH 值调剂至 7.2~7.4 A.5 双层琼脂培植基的筑造 A.5.1 基层NA 培植基 卵白胨 10 g/L 牛肉浸。/L 氯化钠 5 g/L 琼脂 7 g/L pH 值调剂至 7.2~7.4 A.5.2 上层 NA 半固体培植基 卵白胨 10 g/L 牛肉浸粉 3 g。1℃高压灭菌20min A.5.3 灭菌 12。菌斑、噬菌体效价的测定要领 抉择 2-3 个适当的样品稀释梯度A.6 噬菌斑、噬菌体效价的测定要领 A.6.1 葡萄球菌噬，取 100μL用无菌枪头永诀，L 宿主菌增殖液中参预至 100μ，匀混， 5min 37℃孵育。 NA 半固体培植基参预 5mL 上层，匀后混， 固体培植基上倒不才层 NA。固后待凝， 12-14h37℃颠倒培植。均一的噬菌斑样式伺探变成的零丁、，菌斑个数统计噬。 30-300 个噬菌斑的平板举办计数A.6.2 噬菌体效价揣测要领 选用， ）计噬菌体效价按公式（A.1，位有用数字结果保存一。复 3 次该 试验重，取均匀值申诉结果。菌体效价滴度（噬， 噬菌体裂解成果测定要领 A.7.1 宿主菌稀释 用无菌吸管向灭菌离心管中参预9mL SM 缓冲液PFU ／mL) 噬菌斑密度合适平板上的噬斑数×稀释倍数×10……………… （A.1 ） A.7。希奇造备的宿主菌增殖液用无菌枪头摄取 1mL， SM 缓冲液中参预至 9mL，混匀涡旋，至另一新的 9mL SM 缓冲液 顶用新的无菌枪头从中摄取 1mL 参预，匀混。述操作反复上，菌效价稀释至 1×105 CFU/mL遵循宿主菌增殖液的初始效价直至将宿主。 用无菌枪头取 1mL 样品A.7.2 裂解成果测定 5，mL 的宿主菌液 1mL参预 1×10 CFU/。30min 室温静置孵育，液将液体稀释至 10 -10 3 个梯度轻轻混匀后 -1 -3 用 SM 缓冲。L 加至广泛养分琼脂平板上每个梯度永诀取 100 μ，布器涂布匀称用无 菌涂。37℃置 ，18-24h颠倒培植 。两个反复每个梯度。时同，1×10 CFU/mL 的宿主菌增殖液用无菌枪头摄取 1mL 效价 5 为 ， SM 缓冲液参预 1mL，比照措置动作空缺，述操作反复上。个细菌的平板举办计数选用 30-300 ，揣测噬菌体的裂解成果按公式（A.2 ）。复3 次该试验重，取均匀值申诉结果。数）×100%……………………………. （A.2 噬菌体的裂解成果 （1－措置组菌落数/比照组菌落）
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